EU GMP附录一与关键区域空气微生物取样方案及相关法规标准解读

2022版EU GMP附录一与关键区域空气微生物取样方案疑问解答

3月30日2022版EU GMP附录一与关键区域空气微生物取样方案网络研讨会期间，我们收集到了部分参会听众针对该主题所提出的常见问题。根据以下这些问题，lighthouse微生物应用专家将来为您答疑解惑。

1问题1：我想了解无菌制剂生产关键区域的采样方案。

无菌制剂生产关键区域的采样，涉及表面（涂抹和接触碟）和空气监测。根据欧盟最新版GMP附录一的内容，生产关键区域，如A级区，应进行总粒子、活性粒子的连续监测：A级区域应连续监测（颗粒≥0.5和≥5μm），并以合适的取样流速（每分钟至少28升（1ft3）)进行监测；应在A级关键工艺的整个过程进行连续活性空气监测（例如浮游菌或沉降菌），包括设备（无菌装配）组装和关键处理，以捕获所有干预，瞬态事件和任何系统恶化。

采样点的位置及数量应基于风险评估：应在对无菌设备表面、容器、瓶盖和产品造成污染风险最高的位置进行监测。监测点的选择以及取样装置的方向和定位应合理和适当，以便从关键区域获得可靠的数据。另外，取样方法不应对生产操作造成污染的风险。

2问题2：浮游菌监测各级别采样量及依据，A级悬浮粒子日常监测采样量及依据欧盟最新版GMP附录一中要求，应在A级关键工艺的整个过程进行连续活性空气监测（例如浮游菌或沉降菌），对于B级洁净室，应基于对无菌工艺影响的风险考虑类似方法。监测应捕获所有干预、瞬态事件和任何系统恶化，并避免监测操作干预造成的任何风险。A级区空气中微生物监测的要求达到了与悬浮粒子监测同等的高度——连续监测且全覆盖工艺过程。连续监测的方案，浮游菌取样明显优于被动式的沉降碟取样，因此在A级区生产或关键工艺的过程，采用浮游菌方式进行连续的全覆盖采样（代替沉降碟），一直在采样（单片平皿取样达到最大有效时长后进行换碟），采样量基于采样空气流量（25LPM）和采样时长。
A级区域应连续监测（颗粒≥0.5和≥5μm），并以合适的取样流速（每分钟至少28升（1ft3））进行监测，因此对于悬浮粒子的日常监测的采样量无要求，要实现生产工艺过程的全覆盖及连续监测。在洁净室的级别确认时单个采样点的采样量是1000L，但是在环境监测时采样体积不必与洁净室和洁净空气设备的正式级别确认相同，采样量不再是固定的体积数。3问题3：lighthouse的真空泵流量不低于28.3l/min的依据是什么？欧盟最新版GMP附录一9.17中要求，A级区域应连续监测（颗粒≥0.5和≥5μm），并以合适的取样流速（每分钟至少28升（1ft3））进行监测，以捕获所有干预，瞬态事件和任何系统恶化。其中，1ft3= 28.3l。4问题4：A级区浮游菌取样是否可取代沉降碟？目前A级区空气微生物取样，很多制药客户采取的是沉降碟+浮游菌的组合方式，其中沉降碟是4小时换一次平皿；浮游菌仅在生产前、中、后取三次，仅三片培养皿，每片平皿取1000L。最新版欧盟GMP附录一要求监测方法要科学评估，在A级关键工艺的整个过程进行连续活性空气监测（例如浮游菌或沉降菌）（9.24），由于被动式的沉降碟取样无法真实反映空气质量情况，取样结果基于重力作用，有很大的随机性，采用主动式的浮游菌取样更具优势，在设备内部空间允许的条件下，浮游菌取样是可以取代沉降碟的，能更好的反映空气微生物情况，方法更加科学，是符合法规要求的科学评估结果。
想要实现浮游菌的全过程覆盖的连续监测，对单片平皿的有效取样时长有更高的要求，需更长取样时间（减少干预频率）及更好的琼脂培养基暴露保护（换碟时），lighthouse推出的AC100H是采样器和培养基的合体，很好的满足了这些要求，更高质量且更加合规的微生物监测方案。5问题5：对于批次生产结束是否需要做lighthouse数据的批分析批次生产结束后，lighthouse的系统会生成该批次的采样报告，包含粒子取样及浮游菌取样的信息，以及各种异常报警信息，可以对该批次的取样数据进行分析，必要时调取更多的历史数据综合分析，另外，对于浮游菌取样的微生物结果，可在实验室培养得到后更新到批次的监测数据，统一进行分析。

6问题6：lighthouse提供的浮游菌取样方案lighthouse拥有在线和离线两种方案，在线取样方案是RAC+浮游菌采样头组合，多用于生产场景，离线（移动式）取样方案是RAC+浮游菌采样头组合，一般用于生物安全柜，实验室环境和C级、D级等有移动取样需求的场景。
除了仪器硬件的提供，lighthouse还有专业的团队提供知识性的支持，符合最新法规的解决方案，具体内容可通过下方任何一种联系方式与我们进一步沟通。

从EN ISO 14698到EN 17141 微生物污染控制标准有哪些改变 北京中邦兴业

经过17年的无修订，2019年的正式投票将欧洲的EN ISO 14698替换为EN 17141。不久之后，麻烦接踵而至。虽然CEN/TC243（欧洲标准化委员会的技术委员会）发现EN ISO 14698已经过时，并用新的指南取代了它（为了避免混淆，使用了新的编号），但旧版本(国际标准ISO 14698)仍然有效。现在，有一场运动用EN 17141中规定的标准取代ISO 14698，整合文件以减少混乱。

浮游微生物采样器

浮游微生物采样器

01现有的微生物污染控制标准

ISO/TC209是ISO的技术委员会，负责制定与洁净室和相关受控环境相关的决策。他们管理着ISO 14644系列洁净室相关标准，包括ISO 14698-1和-2，即生物污染控制标准。另一方面，CEN/TC243是CEN的技术委员会。它经常做ISO/TC209的镜像工作，因为它有共享的成员。《维也纳协定》允许两个委员会之间共享标准工作，以及平行投票。

从2009年到2014年，一个委员会试图在ISO 14698中解决这些问题，但在文件的目的上存在太多的内部冲突。一些人希望把重点放在分类上，而另一些人则坚持认为重点需要严格放在监测上。他们没能解决这场冲突，5年后，委员会解散了。（这项工作正在继续，重点放在了监控上，而不是分类上）。

目前，ISO 14698-1和-2最近一次修订是在2003年。2020年3月，系统审查（SR）投票决定撤销ISO 14698-1和-2。在欧洲，这在2020年8月被EN 17141所取代。国际标准化组织一直在推动在国际层面采用这些标准，以避免混淆，并将标准合并为一份出版物。根据这一要求，ISO/TC209与CEN/TC243合作，从2004年起恢复了原委员会的工作，以提出一个国际性的、有凝聚力的标准。

02微生物污染控制标准面临的挑战

要达到一个全面、单一的标准并不简单。虽然颗粒物计数远非易事，但微生物污染是一个不同程度的复杂性。它处理的是一开始就不容易恢复、测量或观察的活生物体。微生物污染也带来了一系列问题，这些问题取决于许多变量，包括洁净室的功能。人类是造成这一问题的主要原因，占洁净室内污染的70%至80%。即使重点转向机器人和自动化，洁净室里的人越来越少，也不可避免地会受到一定程度的人类影响。

此外，不同的利益相关者和行业带来了许多独特的挑战。生命科学行业正在寻求无菌，但食品行业需要安全。另一方面，医疗保健行业主要关注感染控制。

没有单一的解决方案来解决所有这些问题，这就是为什么新的技术委员会有来自各个行业的利益相关者以及主题专家来代表他们部门面临的独特困难。

03EN ISO 14698中发现的问题

虽然微生物污染控制的主题很复杂，但EN ISO 14698也提出了许多矛盾和问题。在过去的17年里，面对新的法规、指导方针和技术进步，缺乏更新也于事无补。例如，ISO 14698与当前的ISO 14644方法不一致。没有建立和证明控制的原则，也缺乏分类与监测的明确性。与传统的间接采样、恢复、培养和计数方法相比，严重缺乏“需要考虑的事情”的检查表，以及实时测量方面的一系列挑战。ISO 14698对不同行业解决各种各样的问题也没有什么帮助。

04EN 17141生物污染控制的新方法

考虑到这些问题和复杂情况，EN 17141提出了一个修订标准，旨在获得国际认可。它主要侧重于控制和监测，而不是分类。这是通过风险评估和计划来完成的，该计划侧重于建立并证明控制。它提供了一个更容易、更实用的标准，可用于不同的行业，在利用现有指导方针的同时加强了最佳实践。最重要的是：它创建了一个单一的标准。

本标准保持了ISO 14698的有效性，同时加强了风险评估、影响和缓解（即质量风险管理或QRM）。它与最近发布的GMP附件1中的变化保持一致，并适应不断发展的技术。它去除了不必要的材料，包括液体、纺织品中的生物污染和洗涤中的验证。它还消除了一些问题，如内毒素、病毒和朊病毒。同时，它增加了对医疗器械制造商的指导。

该标准还…

◆审查微生物连续体的范围。

◆对当前的间接测量方法进行了独立审查和评估，其中包括d50的重要性。

◆承认其他标准的作用，但不重复这些标准。

◆区分可培养的和可存活的。

◆强调洁净室和受控环境之间的差异，并提供相应的指导。